микроскопия

МИКРОСКОПИЯ, исследования невидимых невооружённым глазом объектов при помощи микроскопа. Различают световую М., основанную на использовании световых лучей, и электронную М., где вместо световых лучей применяют поток электронов (см. электронный микроскоп). Световая М. подразделяется на обычную, фазово-контрастную, аyопт-ральную, интерференционную, поляризационную, люминесцентную, ультрафиолетовую (см. микроскоп). Непосредственной М. в световом микроскопе предшествует установление освещения (см. микроскопическая техника).

В биол.исследованиях производят М. как живых, так и убитых микрообъектов. Исследование живых бактерий, простейших, клеток макроорганизма проводят в проходящем и отражённом свете. В первом случае изучают прозрачные объекты, приготовляя т. н. "влажные" препараты или выращивая микроколонии бактерий на тонком слое питательного агара. Примерами "влажного" препарата служат раздавленная капля и висячая капля. Более чёткие результаты прижизненного наблюдения получают при выращивании микробов в Ш-образной камере Пешкова или масляной камере Фонбрюна. За микрокультурой можно вести непрерывное наблюдение, используя вместо обычного столика нагревательный или спец. инвертированные микроскопы (типа МБИ-12 и МБИ-13) с термостатом и кинокамерами. В отражённом свете исследуют непрозрачные объекты. Для повышения контрастности микрообъектов используют косое освещение, аноптральные объективы, темнопольные и фазово-контрастные устройства. Для получения дополнит. сведений о толщине, показателях преломления и двойного лучепреломления, содержании сухой массы в клетках, светопропускаемости и др. физич. величинах объекта используют интерференционно-поляризационную М. Прижизненное флюорохромирование микроорганизмов сильно разбавленными растворами красителей акридинового ряда позволяет производить наблюдения за физиологией клеток с помощью люминесцентного микроскопа, заключение бактерий в спец. камеру с инертным газом — исследовать живые клетки при помощи электронной М. Чаще микрообъекты микроскопируют в неживом состоянии, изготовляя препараты или срезы. При использовании светлопольной М. препараты в виде тонкого мазка или среза окрашивают растворами спец. красителей. Для иммунофлюоресцентного исследования препараты обрабатывают сыворотками, мечеными флюорохромами.

Для электронной М. биол. материалы предварительно контрастируют веществами, интенсивно рассеивающими электроны. Для контрастирования в процессе фиксации липидов и белков используют четырёхокись осмия, для фосфолипидов — перманганат калия, для соединений, содержащих углеводы, — Рутений красный. В момент фиксации и обезвоживания препараты окрашивают также уранилацетатом и фосфорновольфрамовой кислотой. Эффективнее контрастировать материал после изготовления ультратонких срезов. Для изучения тон-Ной структуры частиц (но не тонких срезов материала) используют также негативное окрашивание (водным раствором фосфорновольфрамового натрия или урановой соли муравьиной кислоты), создающее вокруг объекта тёмный фон. Для контрастирования объектов их напыляют тяжёлым металлом или готовят из него реплики (отпечатки). В случае иммунохимич. исследования на уровне электронной М. объект предварительно обрабатывают антителами, конъюгированными с ферритином, диазофенилмеркуриацетатом, пероксидазой или йодом.

Микроскопия вирусов (вирусоскопия). Морфологию вирусов изучают след. методами электронной микроскопии: ультратонких срезов, негативного контрастирования и оттенения металлами. Метод ультратонких срезов позволяет установить строение вируса на срезе, тип его нуклеиновой кислоты, способ проникновения в клетку и выхода из неё, а также место размножения в клетке. Метод негативного контрастирования даёт высокое разрешение и позволяет изучить форму и размеры вирионов, структурную организацию их оболочек. Используя антитела, определяют локализацию антигенных детерминант в структуре вируса. Для негативного контрастирования используют очищенные и концентрированные препараты вирусов. Из контрастирующих веществ чаще применяют соли фосфорновольфрамовой и кремнийвольфрамовой кислот. Метод оттенения металлами (золотом, платиной и др.), испарением их в вакууме позволяет установить размеры и форму вирусов, используя длину полученной тени и угол, под которым велось оттенение. Существенный недостаток метода оттенения — значительно меньшее разрешение деталей структуры вируса, чем при методе негативного контрастирования.

Под термином "вирусоскопия" всё чаще стали понимать совокупность методов, с помощью которых выявляют вирусов в биол. материале и изучают их морфологию.

• см. также вирусологические исследования

^{Лит.: Ромейс Б., Микроскопическая техника, пер. с нем., М., 1954; Уикли Б. С., Электронная микроскопия для начинающих, пер. с англ., М., 1975; Киселев Н. А., Электронная микроскопия биологических макромолекул, М., 1965.}